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    二手液相的常見問題及解決方法
    點擊次數:1310 發布時間:2018-11-23
        二手液相的常見故障為保留時間漂移的故障以及泵的一些故障,下面就給大家詳細介紹一下。
        保留時間漂移的故障排除,保留時間不重現有兩種不同的情況,即保留時間漂移和保留時間波動。前者是指保留時間僅沿單方向發生變化,而后者指保留時間無固定規律的波動。將此兩種情況區分開來對找到問題的原因往往很有幫助。如,保留時間的漂移往往由柱老化引起;而柱老化不可能引起保留時間的無規律波動。事實上,保留時間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化,如固定相流失(例如通過水解),色譜柱污染(由樣品或流動相所致)等。
        保留時間漂移的幾種常見的原因如下,色譜柱平衡,如果我們觀察到保留時間漂移,首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相,但如果在流動相中加入少量添加劑(如離子對試劑)則需要相當長的時間來平衡色譜柱。流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時間的漂移。應注意:水是很容易污染的流動相成分。
        固定相穩定性,固定相的穩定性都是有限的,即使在推薦的PH范圍內使用,固定相也會慢慢水解。例如,硅膠基質在pH4時水解穩定性好。水解速度與流動相類型和配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定,長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定,烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。
        經常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環境中也可以發生水解,如氨基鍵合相等。色譜柱污染,保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器,它可以過濾并吸附流動相攜帶的任何物質。污染源可以是:流動相本身,流動相容器,連接管、泵、進樣器和儀器密封墊,以及樣品等。通常通過實驗可判斷污染的來源。
        樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分,就可能是使保留時間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質。如:配藥中的賦形劑,生化樣品(如血清)中的蛋白及類脂類化合物,食品樣品中的淀粉,環境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時間漂移的同時或其后會有反壓的增加??梢酝ㄟ^使用固相提?。⊿PE)等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響。避免色譜柱污染簡單的方法是防患于未然。相比之下,找到問題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑,但并非所有污染物都可以在流動相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。使用保護柱是個非常有效的方法,反沖色譜柱僅是不得已時采用的辦法。
     
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